【產品名稱】

通用名稱：甲型肝炎病毒IgM抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）

【包裝規格】

48人份/盒、96人份/盒。

【預期用途】

適用于定性測定人血清或血漿中甲型肝炎病毒IgM抗體（抗-HAVIgM）。

用于甲型肝炎的早期輔助診斷。

【檢驗原理】

本試劑盒系用抗人IgM(μ鏈)包被的微孔板，甲型肝炎(HAV)抗原和酶標記的抗甲型肝炎病毒(抗-HAV)及其他試劑制成，應用捕獲法原理檢測人血清樣本中的甲肝IgM抗體（抗-HAVIgM），用于甲型肝炎的早期輔助診斷。

【主要組成成分】

注意：不同批號試劑盒中試劑盒組成1、2 不可混用。

各組份組成：

酶結合物：Na₂HPO₄·12H₂O 2.9g/L；KH₂PO₄ 0.2g/L；KCl 0.2g/L；NaCl 8g/L；乙二醇 150mL/L；小牛血清 500mL/L；指示劑1 1.25mL/L；硫柳汞 1g/L；抗-HAV-HRP 適量。

陽性對照：Na₂HPO₄·12H₂O  2.9g/L；NaCl  8g/L；KCl  0.2g/L；KH₂PO₄  0.2g/L；乙二醇150mL/L；小牛血清250mL/L；硫柳汞1g/L；陽性血清 適量。

陰性對照：Na₂HPO₄•12H₂O 2.9g/L；NaCl 8g/L；KCl 0.2g/L；KH₂PO₄ 0.2g/L；硫柳汞 2g/L；乙二醇150mL/L；硫柳汞 1g/L；陰性血清 250mL/L。

顯色劑A：檸檬酸 8g/L；試劑A 0.004g/L；試劑B 2.4mL/L；過氧化尿素 0.7g/L。

顯色劑B：檸檬酸 2.1g/L；乙二胺四乙酸二鈉 0.38g/L；TMB 0.4 g/L。

終止液：2M H₂SO₄。

甲肝抗原：甲肝抗原1000mL/L；牛血清白蛋白 1g/L；指示劑2 1mL/L 。

需要但未提供的物品：

1. 新鮮的蒸餾水或去離子水

2. 一次性手套

3. 精確的微量移液器和潔凈的吸頭

4. 干凈的吸水紙

5. 37℃恒溫箱或水浴鍋

6. 計時器

7. 洗板機或洗瓶機

8. 振蕩器

【儲存條件及有效期】

  試劑盒應置2～8℃中避光保存，有效期12個月。

生產日期及有效期見標簽。

【適用儀器】

酶標儀 檢測波長450nm，參考波長630nm

【樣本要求】

1. 樣本采集不需要特殊準備，不需要受檢者禁食，按照正常的采血技術收集血液，全血樣品最好先放置37℃處理2小時，再將血樣品充分離心，3000轉/分鐘離心6分鐘以上，使血清（漿）不含或極少含血細胞。如果為抗凝血樣品，應將血樣品充分離心后，最好再放置室溫2小時以上。

2. 樣本可使用血清或血漿，檸檬酸、肝素或EDTA等抗凝劑不會影響實驗結果。

3. 樣本中含用疊氮鈉會影響實驗的結果，高度溶血的樣本、沒完全收縮的血清樣本或有微生物污染的樣本可能會引起錯誤的結果。

4. 新鮮的樣本在2～8℃無菌條件下可保存一星期，新鮮樣本可長期貯存在-20℃或以下，避免反復凍融。

【檢驗方法】

1. 實驗準備：從冷藏環境中取出試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時將濃縮洗滌液作1:20稀釋。

2．加樣：標本用生理鹽水作1：1000稀釋后，用移液器吸取100微升，加入反應板孔內，并設陰性對照2孔，每孔100微升；陽性對照2孔，每孔100微升；空白對照1孔；用封片封蓋反應板。置37℃孵育30分鐘。

3．洗滌：棄去孔內液體，用洗滌液注滿每孔，靜置30秒，甩干，反復5次，扣干。

4．同時加HAVAg和酶結合物各50微升，空白對照孔不加，充分混勻后用封片封蓋反應板，置37℃孵育20分鐘。

5．重復3洗滌過程。

6．顯色：每孔滴加顯色劑A、B各50微升，混勻，置37℃孵育10分鐘。

7．加終止液：每孔滴加終止液50微升。

8. 測定：用酶標儀讀數，可選擇單波長450 nm（以空白孔校零）或雙波長450/630 nm，讀取各孔OD值。讀數須在終止反應后10分鐘內完成。

【陽性判斷值】

酶標儀讀數法（波長450nm）：用空白孔校零點，然后讀取各孔OD值。

備注：陰性對照OD值低于0.05，以0.05計算，高于0.05按實際OD值計算。

【檢驗結果的解釋】

1. 陰性結果表明樣本中不含甲肝IgM抗體（抗-HAVIgM），或樣本中的甲肝IgM抗體（抗-HAVIgM）含量低于試劑盒的檢測范圍。

2. 陽性結果表明樣本中含有甲肝IgM抗體（抗-HAVIgM），或非特異反應因素。

3. 陽性結果的樣本需要再進行重復實驗，只有經過重復或再重復實驗仍為陽性結果的樣本，可認為是甲肝IgM抗體（抗-HAVIgM）陽性。所有重復結果為陽性的樣本應經過適當的手段進行確認。

陽性結果的樣本如復檢為陰性結果應被認為是陰性樣本，重復不出陽性結果可能屬于下列一個或多個技術問題引致：

1） 由于儀器或加樣器造成的交叉污染。

2） 顯色劑被金屬離子污染。

3） 由于試劑滴漏造成的交叉污染。

4） 不充分的洗板或最后吸去不徹底。

【檢驗方法的局限性】

   所有高敏感性的免疫實驗系統都存在潛在的非特異性反應，所以重復的陽性結果應以一個適當的方法進行確認。

【產品性能指標】

1.試劑外觀為澄清透明液體，無絮狀沉淀物。

2.陰性參考品符合率：用10份陰性參考品檢測，結果不得出現假陽性。

3.最低檢出限：用最低檢出限參考品檢測，應≥1:16。

4.精密性：用精密性參考品測定，CV（％）應不高于15％（n=10）。

5.穩定性試驗：試劑各組分置37℃至少6天，檢定結果應達到2.1～2.5的要求。

6.裝量：≥標示裝量。

【注意事項】

1. 本品僅用于體外診斷，僅限檢測人體血清、血漿；檢測結果作為診斷指標之一。

2. 從2～8℃條件下取出的樣本應置室溫平衡30分鐘再進行檢測。

3. 須確保樣品加樣量的準確，如果加樣不準確，可能會導致錯誤的實驗結果。

4. 使用微量移液器手工加樣時，每次應該更換吸頭吸取樣本。

5. 用滴瓶滴加時，請將甁中液體搖勻，并棄去1～2滴后垂直勻速地滴加。要避免將組份中的液體觸到或濺到微孔邊緣上，特別是酶結合物。

6. 在操作過程中應盡量避免反應微孔中產生氣泡。

7. 濃縮洗滌液系高濃度磷酸鹽，可能會形成結晶，如未完全溶解，會影響實驗結果，同時可能會堵住自動加樣器或洗板機管道。若出現結晶，請放置37℃充分溶解，然后稀釋混勻使用。

8. 封板膠紙不能重復使用。

9. 用水浴鍋反應時，請將反應板浸放于水中1/3，底部以網格支撐物支撐，水溫控制在37℃。

10. 洗板：1）以洗板機洗板時，洗板機的加液量至關重要，既避免洗液過量溢出，又能充滿反應微孔中，洗板次數不應少于5次，并經常注意檢查加液頭是否堵塞。

2）手工洗板時，請勿使用帶紙屑的吸水材料拍板，以防外源性過氧化物酶類似物或氧化還原物質與顯色劑發生反應，影響檢測結果的準確性。

3）洗板時所用的吸水紙請勿反復使用。

4）洗板機最好在每次使用前、后，用蒸餾水或去離子水清洗干凈，以防止管路堵塞或腐蝕。

11. 如果用任何試劑接觸皮膚和眼睛，必須用大量清水對該部位進行擴大清洗和消毒；終止液為硫酸，具有腐蝕性。

12. 試劑盒內有關組份及臨床樣本均應視為有潛在傳染性，請按相關的實驗室工作規范來執行和處理。