【產品名稱】

通用名稱:丙型肝炎病毒核心抗原檢測試劑盒（酶聯免疫法）

【包裝規格】

96人份/盒

【預期用途】

本產品用于體外定性檢測人血清和血漿中的丙型肝炎病毒游離核心抗原。

利用雙抗體夾心酶聯免疫法原理（ELISA）定性檢測人血清或血漿樣品中的丙型肝炎病毒游離核心抗原，做輔助檢測用。

丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus，HCV）是引起輸血后病毒性非甲非乙型肝炎的主要病原，主要通過輸血、靜脈吸毒傳播，也可通過密切接觸和母嬰傳播。目前全世界約有1.3至1.7億人為慢性丙肝病毒感染，每年有35萬多人死于與丙型肝炎相關的肝臟疾病，據估計，每年有三、四百萬人感染丙肝病毒。

丙肝病毒感染有時會導致急性癥狀疾病。從嚴重程度看，感染丙肝病毒有可能只出現幾周輕微癥狀，也可能終身患有嚴重慢性肝病，并可能導致肝硬化和肝癌。最初被感染后，大約80%的人并不會出現任何癥狀�？赡艹霈F的急性癥狀包括發熱、全身乏力、食欲下降、惡心、嘔吐、腹痛、尿色深、大便顏色變淺、關節酸痛和黃疸（皮膚和眼白發黃）。慢性感染者出現癥狀，可能表明其患有晚期肝病。一般地，15~20%左右的HCV感染者為自限性感染，超過80~85%的感染者發展為慢性丙型肝炎，其中又有20%的可發展為肝纖維化，最終有4~5%的肝纖維化患者發生肝細胞性肝癌，危害十分嚴重。丙型肝炎是由丙肝病毒引起的肝病。

丙型肝炎核心抗原檢測是新近發展的一種HCV感染的檢測方法。由于感染HCV后，HCV核心抗原出現較早，且與血清中HCV RNA載量呈正相關，并在HCV感染治愈或康復后消失，因此，可作為HCV感染的早期診斷、獻血員篩查、慢性HCV感染診斷、高危人群監測、免疫功能障礙患者的HCV感染診斷、鑒別既往感染抑或現癥感染，并可用于抗病毒療效的預測和監測。

【檢驗原理】

本品由基因重組表達的丙型肝炎病毒核心區抗原（HCV-cAg）免疫小鼠制備的單克隆抗體包被微孔板和酶標記抗HCV-cAg單克隆抗體及陽性、陰性對照血清等組成，應用雙抗體夾心酶聯免疫法原理（ELISA）檢測人血清或血漿樣品中丙型肝炎病毒游離核心抗原。

【主要組成成分】

注意：不同批號的組分不得混用。

各組份主要組成：（1）抗體包被板：包被有針對核心抗原的單克隆抗體；（2）酶結合物：三羥甲基氨基甲烷緩沖液，山羊血清，牛血清白蛋白；（3）陽性對照血清：加入丙型肝炎病毒核心抗原檢測為陽性人血清；（4）陰性對照血清：加入丙型肝炎病毒核心抗原檢測為陰性的血清；（5） 洗滌液：NaCl，曲拉通 X-100；（6）顯色劑A：三水合乙酸鈉，過氧化尿素；（7）顯色劑B：檸檬酸，乙二胺四乙酸，四甲基聯苯胺；（8）終止液：硫酸；（9）樣品稀釋液： Tris 緩沖液，NaCl，酪蛋白鈉，牛血清白蛋白，吐溫-20，曲拉通X-100，山羊血清，硫柳汞。  

其他所需物品和儀器

1、新鮮制備的蒸餾水或去離子水；

2、一次性手套；

3、精確的微量移液器和潔凈的吸頭；

4、干凈的吸水紙；

5、37℃恒溫箱或水浴箱；

6、計時器；

7、洗板機或洗瓶；

8、振蕩器；

9、酶標儀。

【儲存條件及有效期】

2～8℃避光保存，有效期12個月。

生產日期及有效期至見標簽。

【適用儀器】

自動酶標測定儀，雙波長時設置主波長450nm，參考波長630nm。單波長時設置檢測波長為450nm，并需設置空白對照調零。

【樣本要求】

    1、樣本可以使用血清或者血漿，檸檬酸鈉、肝素或EDTA等抗凝劑不會影響實驗結果。

2、樣本無需特殊制備處理，采用正確醫用技術采集全血樣本，靜置半小時以上后，3000轉/分鐘離心10分鐘以上，充分分離血清，使血清不含或極少含紅、白細胞，否則可能會導致假陽性結果。

3、不能使用加熱滅活處理后的樣本，脂血樣本應當在實驗前采用超速離心法澄清樣本。

4、黃疸或嚴重污染的樣本將導致錯誤的結果。

5、樣本中含有疊氮鈉會影響實驗結果，不能用疊氮鈉做樣本防腐劑。

6、血清樣本在未充分凝集前離心將導致纖維蛋白的存在，為避免纖維蛋白對結果的影響，必須確保離心處理前樣本已經充分凝集。對于正在接受抗凝劑治療的病人樣本，需要延長凝集時間。

【檢驗方法】 

1、實驗準備

（1）從冷藏環境中取出試劑盒，在室溫下平衡30分鐘。

（2）洗滌液配制：試劑盒中的洗滌液為濃縮洗滌液，在合適的潔凈容器內用新鮮制備的蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液稀釋20倍，混勻備用。

（濃縮洗滌液為高濃度磷酸鹽緩沖液，在溫度低時，可能會有結晶析出；請在使用前確保濃縮洗滌液無結晶析出，如發現有結晶析出，請放置水浴鍋中加熱溶解，否則會影響洗滌效果。）

2、操作程序

1）每次實驗需在包被板上設置一個空白孔，設置陰、陽性對照各雙孔。

2）加陽性對照血清：設兩孔為陽性對照，每孔加入陽性對照血清200μL。

3）加陰性對照血清：設兩孔為陰性對照，每孔加入陰性對照血清200μL。

4）加樣品稀釋液：每孔（不包括陰、陽性對照孔）中加入100μL樣品稀釋液�？瞻卓准尤�200μL樣品稀釋液。

5）加樣：樣品孔每孔加入樣品（血清或血漿）100μL。

6）溫育：用不干膠片封板后置37℃±1℃溫浴振蕩60分鐘。

7）洗滌：小心揭掉封板膜，吸去反應板條孔內液體，用洗滌液工作液注滿每孔，每孔應加入不少于400μL的洗滌液工作液。靜置5～10秒，吸去孔內洗滌液，如此重復5次。最后在干凈的吸水紙上拍干。

8）加酶結合物：每孔加200μL酶結合物。

9）溫育：用不干膠片封板后置37℃±1℃溫浴30分鐘。

10）洗滌：操作同7。

11）加顯色劑：每孔先加入100μL顯色劑A，再加入100μL顯色劑B，充分混勻，37℃±1℃溫浴避光顯色15分鐘。

12）終止反應：每孔加50μL終止液，充分混勻。

13） 結果測定：結果需在反應終止后10分鐘內進行測定。使用酶標儀測量各孔吸光度值，可選擇單波長450nm（需設空白孔調零），或選擇雙波長主波長450nm，參考波長630nm，讀取各孔OD值。

【【陽性判斷值】

臨界值（CUT OFF）確定：陰性對照平均值+0.06（陰性對照OD值≤0.06時按0.06計算）。

陽性對照每孔OD值>0.8，陰性對照OD值每孔＜0.1時，測定結果有效。

結果判定：

（1）待測樣品OD值≥臨界值（CUT OFF）判定為HCV核心抗原陽性；

（2）待測樣品OD值＜臨界值（CUT OFF）判定為HCV核心抗原陰性。

對初檢陽性的樣品，應進行雙孔復檢以確認真實結果。

【【檢驗結果的解釋】

1、血清樣本未完全凝集、血漿樣本包含纖維蛋白或樣本被嚴重污染都會對結果造成影響。

2、實驗中使用長時間貯存或反復凍融的樣本會對本試劑的檢測靈敏度造成影響，建議使用新鮮樣本進行實驗。

【檢驗方法的局限性】

1、本試劑盒僅用于定性檢測人血清或血漿樣品中的HCV游離核心抗原。

2、由于ELISA反應原理的限制，本試劑檢測結果陰性并不能完全排除HCV感染的可能，檢測結果陽性必須結合確證試劑或其他指標和臨床信息進行分析。

【【產品性能指標】

1、用5份企業HCV核心抗原陽性參考血清檢測，結果不得出現假陰性；用4份國家HCV核心抗原陽性參考血清檢測，陽性參考品符合率（+/+）應≥3/4。

用10份企業或國家HCV核心抗原陰性參考血清檢測，結果不得出現假陽性。用4份企業最低檢出限參考品檢測，S1、S2 和S3應為陽性；S4為陰性；用5份國家最低檢出限參考品檢測，L1、L2 和L3應為陽性，L4﹑L5可陽性或陰性。   

用企業或國家精密性參考品重復10次檢測，所有孔實驗結果均為陽性，CV（%）≤15%（n=10）。

穩定性試驗各組分置37℃6天后，上述四項指標均應符合規定。

2、本試劑檢測丙型肝炎病毒核心抗原的靈敏度為1pg/mL。

3、交叉反應實驗表明，HBV，HIV和HAV陽性樣本不影響本試劑盒對HCV核心抗原的檢測。對25例RF高濃度陽性樣本及23份ANA高濃度陽性樣本分別采用本試劑進行HCV核心抗原檢測，兩類樣本假陽性數均為1例，特異性分別為96.0%和95.7%。

4、臨床研究60份同源血（同一患者的血清和血漿）檢測結果完全一致。

【【注意事項】

1、從2～8℃條件下取出的樣本應置于室溫平衡30分鐘再進行檢測。

2、須確保加樣量的準確，如果加樣不準確，可能會導致錯誤的實驗結果。

3、使用微量移液器手工加樣時，每次應該更換吸頭吸取樣本。

4、在操作過程中應盡量避免微孔中產生氣泡。

5、濃縮洗滌液系高濃度磷酸鹽，可能會形成結晶，如未完全溶解，會影響實驗結果，同時可能會堵住自動加樣器或洗板機管道。若出現結晶，請放置37℃充分溶解，然后稀釋均勻使用。

6、封板膠紙不能重復使用。

7、用水浴鍋反應時，請將反應板浸放于水中1/3，底部以網格支撐物支撐，水溫控制在37℃。

8、洗板：（1）以洗板機洗板時，洗板機的加液量至關重要，即避免洗液過量溢出，又能充滿反應微孔中，洗板次數不應少于5次，并經常注意檢查加液頭是否堵塞。

（2）手工洗板時，請勿使用帶紙屑的吸水材料拍板，以防外源性過氧化物酶類似物或氧化還原物質與顯色劑發生反應，影響檢測結果的準確性。

（3）洗板時所用的吸水紙請勿反復使用。

（4）洗板機最好在每次使用前、后，用蒸餾水或去離子水沖洗干凈，以防止管路堵塞或腐蝕。

9、如果有任何試劑接觸皮膚和眼睛，必須用大量清水對該部位進行擴大清洗和消毒；終止液為硫酸，具有腐蝕性。

10、試劑盒內有關組份及臨床樣本均應視為有潛在傳染性，請按相關的實驗室工作規范來執行和處理。